PⅢNP Elisa試劑盒RNA酶保護法是近十年發展起來的一種全新的mRNA定量分析方法。其基本原理是將標記的特異RNA探針(32P或)與待測的RNA樣品液相雜交,標記的特異RNA探針按堿基互補的原則與目的基因特異性結合,形成雙鏈RNA;未結合的單鏈RNA經RNA酶A或RNA酶T消化形成寡核糖核酸,而待測目的基因與特異RNA探針結合后形成雙鏈RNA,免受RNA酶的消化,故該方法命名為RNA酶保護實驗。
與Northern blot和RT-PCR比較,RPA有以下幾個優點:
. 檢測靈敏度比Northern雜交高。由于Northern雜交步驟中轉膜和洗膜都將造成樣品和探針的損失,使靈敏度下降,而RPA將所有雜交體系進行電泳,故損失小,PⅢNP Elisa試劑盒提高了靈敏度。
2. 由于PCR擴增過程中效率不均一和反應“平臺”問題,基于PCR產物量進行分析所得數據的可靠性將下降,而RPA沒有擴增過程,因此,分析的數據真實性較高。
3.由于與反義RNA探針雜交的樣品RNA僅為該RNA分子的部分片段,因此,部分降解的RNA樣品仍可進行分析。
4.步驟較少,耗時短。與Northern雜交相比,省去了轉膜和洗膜的過程。
5. RNA-RNA雜交體穩定性高,無探針自身復性問題,無須封閉。
6. 一個雜交體系中可同時進行多個探針雜交,無競爭性問題。
7. PⅢNP Elisa試劑盒檢測分子長度可以任意設置,靈活性大。RPA的缺點是需要同位素標記探針。