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DIY夾心法ELISA常見技術指南
點擊次數:614 更新時間:2017-04-20
   DIY夾心法ELISA常見技術指南:
  、選擇抗體時選擇一個單抗和一個多抗進行配對;若選擇兩個單抗,必須識別不同表位的抗體;從同一家公司選擇抗體對。
  2、ELISA實驗中為了確定*信號和zui低背景應將捕獲抗體(0.5-4μg/ml)和檢測抗體(0.25-2μg/ml)在預實驗中進行彼此相抗的滴定。同時,應包括在適當范圍內的標準品的系列稀釋。按試劑說明書常規提供的范圍進行操作。
  3、標準品的配制:對于每種細胞因子應仔細閱讀說明書,注意每批的細節。在使用細胞因子前,瞬時離心試劑瓶,盡可能多地收回其中的細胞因子。根據每批說明書中的細節,將凍干的細胞因子復溶。
  4、一般待測抗原標準曲線的線性范圍的可通過將標準品做8次2倍系列稀釋從2000pg/ml 到5pg/ml。可利用標準的ELISA操作流程、放大試劑盒、第三類試劑、或改變酶底物系統可在一定范圍內提高靈敏度。
  5、為了優化靈敏度,建議過夜孵育標準品和標本。
  6、若使用過氧化物酶作為顯色系統,應嚴禁在洗液和稀釋液中加疊氮鈉,疊氮鈉可抑制過氧化物酶的活性。
  7、當測定混合液體中的抗原時,如血清,建議在標本稀釋液中加不相干的Ig.

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